Informacija

Kako ubrizgana pročišćena anti-D antitijela sprječavaju prirodnu proizvodnju antitijela kako bi se spriječila hemolitička bolest novorođenčeta?

Kako ubrizgana pročišćena anti-D antitijela sprječavaju prirodnu proizvodnju antitijela kako bi se spriječila hemolitička bolest novorođenčeta?


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Tretmani koji uključuju anti-D protutijela daju se trudnicama koje nose Rh+ fetuse kad majka ima Rh-krvnu grupu kako bi se spriječila hemolitička bolest novorođenčeta tijekom druge trudnoće. Anti-D antitijela se ubrizgavaju tijekom kasnijih faza trudnoće i odmah nakon rođenja kako bi se eliminirale sve Rh+ krvne stanice u majci prije nego što majka prirodno proizvede antitijela D-antigena. Ako protutijela ne napadaju izravno stanice, što sprječava majčine makrofage da zahvate Rh+ krvna zrnca vezana za antitijela, postanu stanicu koja predstavlja antigen i tako pokrenu proces proizvodnje antitijela i spremanja antigena u memorijskim stanicama? Nisu li Fc receptori na makrofagima kompatibilni s ubrizganim anti-D antitijelima?


Monoklonski anti-D za imunoprofilaksu

* Dopisivanje: Marion L. Scott, Međunarodni referentni laboratorij za krvne grupe, Nacionalna služba za krv, Southmead Road, Bristol BS10 5ND, UK E-mail: [email protected] Potražite više radova ovog autora

Međunarodni referentni laboratorij za krvne grupe, Nacionalna služba za krv, Bristol, UK

* Dopisivanje: Marion L. Scott, Međunarodni referentni laboratorij za krvne grupe, Nacionalna služba za krv, Southmead Road, Bristol BS10 5ND, UK E-mail: [email protected] Potražite više radova ovog autora


Sažetak

Hemostaza je složen proces koji uključuje usklađeno djelovanje molekularnih i vaskularnih komponenti. Njegovo osnovno razumijevanje, kao i dijagnostički i terapijski aspekti uvelike su imali koristi od uporabe monoklonskih protutijela. Zanimljivo je da jedno-domena protutijela izvedena iz kamelida (sdAbs), također poznata kao VHH ili nanotijela, postala su dostupna tijekom prethodna 2 desetljeća kao alternativni alati u tom pogledu. U usporedbi s klasičnim antitijelima, sdAbs je lakše proizvesti, a njihova mala veličina olakšava njihovo inženjering i funkcionalizaciju. Stoga ne čudi da se sdAbs sve više koriste u istraživanjima vezanim uz hemostazu. Osim toga, oni imaju sposobnost prepoznavanja jedinstvenih epitopa nedostupnih za potpuna monoklonska antitijela. Ovo svojstvo može se koristiti za razvoj novih dijagnostičkih testova koji identificiraju konformacijske varijante hemostatskih proteina. Primjeri uključuju sdAb koji vežu aktivni, ali ne i globularni von Willebrandov faktor ili slobodni faktor VIIa, ali ne i faktor VIIa vezan za tkivni faktor. Konačno, sdAbs imaju visoki terapijski potencijal, primjer za to je kaplacizumab, homodimerni sdAb usmjeren na von Willebrandov faktor koji je odobren za liječenje trombotične trombocitopenične purpure. U ovom će se pregledu raspravljati o različitim primjenama sdAbs u trombozi i istraživanju vezanim uz hemostazu, dijagnostici i terapijskim strategijama.

Osnove

  • Antitijela s jednom domenom (sdAbs) dobivena iz kamelija sve se više koriste kao istraživački alati.
  • sdAbs protiv koagulacijskih proteina pomogli su riješiti pitanja biokemijskih istraživanja.
  • sdAbs se mogu koristiti kao dijagnostički alati, ali i za terapiju tromboze i hemostaze.
  • Inženjering proteina povećava svestranost sdAb i njihove potencijalne primjene.

Diskriminacija Sebe od Nesebstva

Imunološki sustav koristi mnoge snažne efektorske mehanizme koji imaju sposobnost uništavanja širokog spektra mikrobnih stanica i čišćenja širokog raspona otrovnih i alergenih tvari. Stoga je ključno da imunološki odgovor može izbjeći oslobađanje ovih destruktivnih mehanizama protiv vlastitih tkiva domaćina sisavaca. Sposobnost imunološkog odgovora da izbjegne oštećenje vlastitih tkiva naziva se samopodnošljivost. Budući da je neuspjeh samopodnošenja temelj široke klase autoimunih bolesti, ovaj je proces opsežno proučavan. Sada je jasno da su mehanizmi za izbjegavanje reakcije na samo-antigene izraženi u mnogim dijelovima i urođenog i adaptivnog imunološkog odgovora. O mehanizmima koji leže u osnovi zaštite normalnih vlastitih tkiva od imunološkog oštećenja raspravljat će se pri uvođenju svakog od glavnih efektorskih krakova imunološkog odgovora domaćina.

Budući da je važan aspekt ruka T imunološkog sustava prepoznavanje stanica domaćina zaraženih virusima, unutarstaničnim bakterijama ili drugim unutarstaničnim parazitima, T stanice su razvile elegantan mehanizam koji prepoznaje strane antigene zajedno sa samoantigenima kao molekulu složene (vidi ‘Prepoznavanje antigena pomoću T limfocita ’ u nastavku). Ovaj zahtjev da T stanice prepoznaju i vlastite strukture i strane antigene čini potrebu da te stanice zadrže samopodnošljivost posebno važne.


Poglavlje 1 Imunološka regulacija B stanicama i antitijelima: Pogled prema klinici

B limfociti doprinose imunosti na više načina, uključujući proizvodnju antitijela, prezentaciju antigena T stanicama, organogenezu sekundarnih limfoidnih organa i lučenje citokina. Nedavna klinička ispitivanja pokazala su da iscrpljivanje B stanica može biti vrlo korisno za pacijente s autoimunim bolestima, implicirajući B stanice i antitijela kao ključne pokretače patologije. Međutim, treba imati na umu da odgovori B stanica i antitijela također imaju važnu regulatornu ulogu u ograničavanju autoimune patologije. Ovdje analiziramo kliničke primjere koji ilustriraju potencijal antitijela za liječenje poremećaja posredovanih imunološkim sustavom i raspravljamo o temeljnim mehanizmima. Nadalje, ispitujemo regulatorne funkcije aktiviranih B stanica, njihovo sudjelovanje u prestanku nekih eksperimentalnih autoimunih bolesti i njihovu uporabu u staničnoj terapiji za takve patologije. Ove supresivne funkcije B stanica i antitijela ne samo da otvaraju nove načine za iskorištavanje autoimunih bolesti, već ih treba uzeti u obzir i pri izradi novih strategija cijepljenja protiv mikroba i tumora.


5 Uloga Rh antitijela u hemolitičkoj bolesti novorođenčeta

Nedavni uvidi u odnos strukture i funkcije IgG, prirodu Fc receptora i njihovu interakciju s antitijelima te stanične mehanizme uključene u imunološko uništavanje stanica osjetljivih na IgG pridonijeli su potpunijem razumijevanju uloge Rh antitijela u HDN. Kako se to razumijevanje povećalo, tako su razvijeni i ocijenjeni različiti dijagnostički i terapijski pristupi kako bi se predvidjela ili poboljšala ozbiljnost bolesti.

Uloga Rh antitijela u HDN-u može se razmatrati u tri konteksta: majčin anti-D, monoklonski anti-D i profilaktički anti-D. Anti-D nastao nakon majčine aloimunizacije može se transportirati kroz posteljicu, što rezultira uništenjem osjetljivih crvenih stanica mononuklearnim fagocitima u fetusa i dojenčeta. Korištenje monoklonskog anti-D dalo je uvid u stanične i molekularne mehanizme uključene u uništavanje crvenih krvnih stanica, te je olakšalo razvoj i evaluaciju testova koji koriste majčinski anti-D za predviđanje ozbiljnosti HDN-a. Poliklonski anti-D, koji se daje profilaktički, može spriječiti aloimunizaciju majke na D-pozitivne fetalne crvene stanice.

Budući razvoj vjerojatan je na nekoliko područja. Profilaktički poliklonski anti-D može se, u cijelosti ili djelomično, zamijeniti monoklonskim anti-D. Razvoj i uvođenje staničnih testova kao neinvazivnih testova za predviđanje težine bolesti vjerojatno će se nastaviti jer su preliminarni rezultati ohrabrujući. Konačno, mogu se procijeniti nove strategije za poboljšanje ozbiljnosti bolesti, uključujući ulogu ivIgG i FcγAntitijela koja blokiraju R.


Mehanizmi djelovanja intravenoznog imunoglobulina i poliklonalnog anti-D imunoglobulina u poboljšanju imunološke trombocitopenične purpure: što doista znamo?

Intravenozni imunoglobulin (IVIg) koristi se više od 25 godina za liječenje sve većeg broja autoimunih bolesti, uključujući imunološku trombocitopeničnu purpuru. Iako je točan mehanizam djelovanja IVIg ostao nedokučiv, postavljene su mnoge teorije, uključujući blokadu/inhibiciju mononuklearnog fagocitnog sustava, neutraliziranje autoantitijela protutijelima protiv idiotipa, klirens patogenih autoantitijela zbog konkurentne inhibicije Fc receptora neonatalnog imunoglobulina, modulaciju citokina , neutraliziranje komplementa i stvaranje imunološkog kompleksa koji dovodi do punjenja dendritičkih stanica. Poliklonski anti-D imunoglobulin je poliklonski IVIg proizvod obogaćen antitijelima usmjerenim na RhD antigen na crvenim krvnim zrncima i koji se također uspješno koristi za liječenje imunološke trombocitopenije u pacijenata s RhD +. Primarna teorija za objašnjenje poliklonalne funkcije anti-D imunoglobulina klasično je bila blokada mononuklearnog fagocitnog sustava, iako je modulacija Fcγ receptorska ekspresija i/ili imunomodulacija također mogu igrati ulogu. Rad u kojem se koristi mišji model imunološke trombocitopenične purpure radi boljeg razumijevanja mehanizma djelovanja ova dva terapijska sredstva fokus je ovog članka.

Ovaj rad je podržan od strane Kanadskog instituta za zdravstvena istraživanja, Ottawa, Ontario.


Ljudska antitijela iz kombinatornih knjižnica

Kombinatorna protutijela igrat će značajnu ulogu u dizajnu cjepiva i novih antivirusnih lijekova. Antitijela također mogu pružiti način određivanja funkcije receptora in vivo te služe kao predlošci za oblikovanje malih molekula. Pokazalo se da kombinirana antitijela pružaju točan funkcionalni odraz prirodnog odgovora što je dokazano sposobnošću kloniranih antitijela da se natječu sa antitijelima u serumu za vezanje antigena. Kombinatorna protutijela također pružaju koristan (ako je pomalo nepotpun) vodič za molekularnu biologiju odgovora. Sa svojom sposobnošću pružanja velikog broja ljudskih antitijela usmjerenih protiv jednog antigena, kombinatorni pristup omogućuje brzu procjenu imuno dominantnog, kao i neutraliziranje epitopa u kontekstu ljudskog odgovora. Ove bi se informacije trebale koristiti u budućnosti za usmjeravanje dizajna učinkovitijih cjepiva. Novootkrivena sposobnost stvaranja ljudskih antitijela i razvoja njihovih specifičnosti i afiniteta, ex vivo obećanja povećala uporabu ove klase molekula u službi zdravlja ljudi.


Primjene istraživanja

Imunofluorescentna slika eukariotskog citoskeleta. Aktinski filamenti prikazani su crvenom bojom, mikrotubule zelenom bojom, a jezgre plavom bojom.

Specifična antitijela proizvode se ubrizgavanjem antigena u sisavca, poput miša, štakora, zeca, koze, ovce ili konja za velike količine antitijela. Krv izolirana od ovih životinja sadrži poliklonska antitijela- više antitijela koja se vežu za isti antigen - u serumu, koji se sada može nazvati antiserum. Antigeni se također ubrizgavaju u piliće za stvaranje poliklonskih antitijela u žumanjku. [59] Za dobivanje antitijela koje je specifično za jedan epitop antigena, limfociti koji luče antitijela izoliraju se iz životinje i ovjekovječe spajanjem s staničnom linijom raka. Spojene stanice nazivaju se hibridomi i neprestano će rasti i lučiti antitijela u kulturi. Pojedinačne stanice hibridoma izoliraju se razrjeđivanjem kloniranjem kako bi nastali stanični klonovi koji svi proizvode isto antitijelo. monoklonska antitijela. [60] Poliklonska i monoklonska protutijela često se pročišćavaju pomoću proteina A/G ili kromatografije sa afinitetom prema antigenu. [61]

U istraživanju se pročišćena antitijela koriste u mnogim aplikacijama. Najčešće se koriste za identifikaciju i lociranje unutarstaničnih i izvanstaničnih proteina. Protutijela se koriste u protočnoj citometriji za razlikovanje tipova stanica po proteinima koje izražavaju različite vrste stanica izražavaju različite kombinacije klastera molekula diferencijacije na svojoj površini i proizvode različite unutarstanične i izlučujuće proteine. [62] Također se koriste u imunoprecipitaciji za odvajanje proteina i svega što je na njih vezano (koimunoprecipitacija) od drugih molekula u staničnom lizatu, [63] u Western blot analizama za identifikaciju proteina odvojenih elektroforezom [64] i u imunohistokemiji ili imunofluorescencija za ispitivanje ekspresije proteina u presjecima tkiva ili za lociranje proteina unutar stanica uz pomoć mikroskopa. [62] [65] Proteini se također mogu detektirati i kvantificirati s antitijelima, pomoću ELISA i ELISPOT tehnika. [66] [67]


Antitijela (imunoglobulin) 2. dio

Funkcija:

Aktivirane B stanice diferenciraju se u stanice koje proizvode antitijela, nazvane plazma ćelije koje luče topljiva antitijela, ili memorijske stanice koje nakon toga opstaju u tijelu godinama kako bi imunološki sustav zapamtio antigen i brže reagirao na buduću izloženost.

U prenatalnoj i neonatalnoj fazi života prisutnost antitijela osigurava se pasivnom imunizacijom od majke. Rana proizvodnja endogenih antitijela razlikuje se za različite vrste antitijela i obično se javlja u prvim godinama života. Budući da antitijela slobodno postoje u krvotoku, za njih se kaže da su dio humoralnog imunološkog sustava. Cirkulirajuća protutijela proizvode klonske B stanice koje specifično reagiraju samo na jedan antigen (primjer je fragment proteina kapsidnog virusa). Protutijela pridonose imunitetu na tri načina: sprječavaju ulazak patogena ili oštećenje stanica vežući se na njih, stimuliraju uklanjanje patogena pomoću makrofaga i drugih stanica premazivanjem patogena te potiču uništavanje patogena stimulirajući druge imunološke odgovore, poput komplementarnog puta .

1) Aktivacija komplementa:

Protutijela koja se vežu za površinske antigene, na primjer, na bakteriju, privlače prvu komponentu kaskade komplementa sa svojim Fc područjem i pokreću aktivaciju "klasičnog" sustava komplementa. To rezultira ubijanjem bakterija na dva načina. Prvo, vezanje molekula antitijela i komplementa označava mikrobe koje fagociti unose u proces koji se naziva opsonizacija, te fagocite privlače određene molekule komplementa nastale u kaskadi komplementa. Drugo, neke komponente sustava komplementa tvore kompleks napada membrane koji pomaže antitijelima da izravno ubiju bakteriju. Antitijelo je molekula koja specifično inaktivira antigen.

2) Aktivacija efektorskih stanica:

Za borbu protiv patogena koji se repliciraju izvan stanica, antitijela se vežu za patogene da ih povežu, uzrokujući njihovu aglutinaciju. Budući da protutijelo ima najmanje dva paratopa, ono može vezati više od jednog antigena vezanjem identičnih epitopa koji se nalaze na površini tih antigena. Premazivanjem patogena, antitijela potiču efektorske funkcije protiv patogena u stanicama koje prepoznaju njihovu Fc regiju.

One stanice koje prepoznaju obložene patogene imaju Fc receptore koji, kao što naziv govori, stupaju u interakciju s Fc regijom IgA, IgG i IgE antitijela. Angažman određenog antitijela s Fc receptorom na određenoj stanici pokreće efektnu funkciju te će fagociti fagocitirati, fagocitoze će se degranulirati, mastocite i neutrofili, stanice prirodne ubojice će osloboditi citokine i citotoksične molekule što će u konačnici rezultirati uništavanjem invazije mikrob. Fc receptori su specifični za izotip, što daje veću fleksibilnost imunološkom sustavu, pozivajući se samo na odgovarajuće imunološke mehanizme za različite patogene.

3) Prirodna antitijela:

Ljudi i viši primati također proizvode "prirodna antitijela" koja su prisutna u serumu prije virusne infekcije. Prirodna protutijela definirana su kao antitijela koja se proizvode bez ikakve prethodne infekcije, cijepljenja, izloženosti drugom stranom antigenu ili pasivne imunizacije. Ova antitijela mogu aktivirati klasični put komplementa koji dovodi do lize omotanih virusnih čestica mnogo prije nego što se aktivira adaptivni imunološki odgovor. Mnoga prirodna protutijela usmjerena su protiv disaharidne galaktoze α (1,3) -galaktoze (α-Gal), koja se nalazi kao terminalni šećer na glikoziliranim staničnim površinskim proteinima, a nastaje kao odgovor na proizvodnju ovog šećera bakterijama koje se nalaze u ljudska crijeva. Smatra se da je odbacivanje ksenotransplantiranih organa djelomično rezultat prirodnih antitijela koja cirkuliraju u serumu primatelja vezanja za α-Gal antigene izražene na donorskom tkivu.

Raznolikost imunoglobulina:

Gotovo svi mikrobi mogu izazvati odgovor antitijela. Uspješno prepoznavanje i iskorjenjivanje mnogih različitih vrsta mikroba zahtijeva raznolikost među antitijelima čiji sastav aminokiselina varira dopuštajući im interakciju s mnogo različitih antigena. Procjenjuje se da ljudi stvaraju oko 10 milijardi različitih antitijela, od kojih svako može vezati zaseban epitop antigena. Iako se u jednom pojedincu stvara ogroman repertoar različitih antitijela, broj gena dostupnih za stvaranje ovih proteina ograničen je veličinom ljudskog genoma. Razvilo se nekoliko složenih genetskih mehanizama koji omogućuju kralježničnim B stanicama da generiraju raznoliku skupinu antitijela iz relativno malog broja gena antitijela.

Područje (lokus) kromosoma koji kodira antitijelo veliko je i sadrži nekoliko različitih gena za svaku domenu antitijela lokus koji sadrži gene teškog lanca (IGH) nalazi se na kromosomu 14, a lokusi koji sadrže gene lambda i kapa lakog lanca (IGL i IGK) nalaze se na kromosomima 22 i 2 kod ljudi. Jedna od tih domena naziva se varijabilna domena, koja je prisutna u svakom teškom i lakom lancu svakog antitijela, ali se može razlikovati u različitim antitijelima nastalim iz različitih B stanica. Razlike između varijabilnih domena nalaze se na tri petlje poznate kao hipervarijabilne regije (HV-1, HV-2 i HV-3) ili regije koje određuju komplementarnost (CDR1, CDR2 i CDR3) .

Očuvana područja okvira podržavaju CDR -ove unutar varijabilnih domena. Lokus teškog lanca sadrži oko 65 različitih gena varijabilne domene koji se svi razlikuju po svojim CDR -ima. Kombiniranjem ovih gena s nizom gena za druge domene antitijela stvara se velika konjica antitijela s visokim stupnjem varijabilnosti. Ta se kombinacija naziva V (D) J rekombinacija o kojoj se govori u nastavku.

Somatska rekombinacija imunoglobulina, također poznata kao V (D) J rekombinacija, uključuje stvaranje jedinstvene varijabilne regije imunoglobulina. Varijabilna regija svakog teškog ili lakog lanca imunoglobulina kodirana je u nekoliko komada koji su poznati kao genski segmenti (podgeni). Ti se segmenti nazivaju segmenti promjenjivi (V), raznolikost (D) i spajanje (J). V, D i J segmenti nalaze se u teškim lancima Ig, ali samo segmenti V i J nalaze se u lakim lancima Ig. Postoji više kopija segmenata gena V, D i J i tandemski su raspoređeni u genomima sisavaca. U koštanoj srži, svaka B stanica u razvoju će sastaviti varijabilnu regiju imunoglobulina nasumičnim odabirom i kombiniranjem jednog V, jednog D i jednog J genskog segmenta (ili jednog V i jednog J segmenta u lakom lancu). Budući da postoji više kopija svake vrste genskog segmenta, a za stvaranje svake varijabilne regije imunoglobulina mogu se koristiti različite kombinacije genskih segmenata, ovaj proces generira ogroman broj antitijela, od kojih svako ima različite paratope, a time i različite specifičnosti antigena. Zanimljivo je da je preuređivanje nekoliko subgena (npr. V2 obitelji) za imunoglobulin lambda lakog lanca povezano s aktivacijom mikroRNA miR-650, što dodatno utječe na biologiju B-stanica.

Nakon što B stanica tijekom rekombinacije V (D) J proizvede funkcionalni gen imunoglobulina, ne može eksprimirati nijednu drugu varijabilnu regiju (proces poznat kao alelno isključivanje) pa svaka B stanica može proizvesti antitijela koja sadrže samo jednu vrstu varijabilnog lanca.

Nakon aktivacije s antigenom, B stanice se počinju brzo razmnožavati. U tim stanicama koje se brzo dijele, geni koji kodiraju varijabilne domene teških i lakih lanaca prolaze visoku stopu točkaste mutacije, postupkom koji se naziva somatska hipermutacija (SHM). SHM rezultira približno jednom promjenom nukleotida po varijabilnom genu, po diobi stanice. Kao posljedica toga, bilo koje kćeri B stanice će steći male razlike u aminokiselinama u varijabilnim domenama svojih lanaca antitijela.

To služi za povećanje raznolikosti baze antitijela i utječe na afinitet vezanja antitijela za antigen. Neke točkaste mutacije rezultirat će proizvodnjom antitijela koja imaju slabiju interakciju (nizak afinitet) s njihovim antigenom od izvornog protutijela, a neke će mutacije generirati antitijela s jačom interakcijom (visoki afinitet). B stanice koje na svojoj površini izražavaju antitijela visokog afiniteta primit će snažan signal preživljavanja tijekom interakcije s drugim stanicama, dok one s antitijelima niskog afiniteta neće, i umrijet će apoptozom. Tako će B stanice koje izražavaju antitijela s većim afinitetom za antigen nadmašiti one sa slabijim afinitetima za funkciju i preživljavanje. Postupak stvaranja antitijela s povećanim afinitetima vezanja naziva se sazrijevanje afiniteta. Sazrijevanje afiniteta događa se u zrelim B stanicama nakon V (D) J rekombinacije i ovisi o pomoći pomoćnih T stanica.

Prebacivanje izotipa ili klase biološki je proces koji se događa nakon aktivacije B stanice, što omogućuje stanici da proizvodi različite klase antitijela (IgA, IgE ili IgG). Različite klase antitijela, a time i efektorske funkcije, definirane su konstantna (C) područja teškog lanca imunoglobulina. U početku, naivne B stanice eksprimiraju samo IgM i IgD na površini stanice s identičnim regijama vezanja za antigen. Svaki izotip prilagođen je za zasebnu funkciju, pa bi nakon aktivacije moglo biti potrebno protutijelo s efektorskom funkcijom IgG, IgA ili IgE za učinkovito uklanjanje antigena.

Prebacivanje klase omogućuje različitim stanicama kćerima iz iste aktivirane B stanice da proizvode antitijela različitih izotipova. Samo se konstantno područje teškog lanca antitijela mijenja tijekom promjene klase varijabilnih regija, a time i specifičnost antigena, ostaju nepromijenjene. Tako potomci jedne B stanice mogu proizvesti antitijela, sva specifična za isti antigen, ali sa sposobnošću stvaranja efektorske funkcije prikladne za svaki antigeni izazov. Prebacivanje klase pokreću citokini čiji nastanak izotipa ovisi o tome koji su citokini prisutni u okolini B stanica.

Prebacivanje klasa događa se u lokusu gena teškog lanca mehanizmom koji se naziva rekombinacija klase prekidača (CSR). Ovaj mehanizam oslanja se na očuvane nukleotidne motive, nazvane prekidačka (S) područja, koja se nalaze u DNA uzvodno od svakog gena konstantne regije (osim u δ-lancu). DNK lanac se prekida djelovanjem niza enzima u dvije odabrane S-regije. Egzon varijabilne domene ponovno se spaja kroz proces koji se naziva nehomologno spajanje kraja (NHEJ) sa željenom konstantnom regijom (γ, α ili ε) . Ovaj proces rezultira genom imunoglobulina koji kodira antitijela različitog izotipa.

Skupinu antitijela možemo nazvati monovalentnim (ili specifičnim) ako imaju afinitet za isti epitop, ili za isti antigen (ali potencijalno različite epitope na molekuli), ili za isti soj mikroorganizma (ali potencijalno različite antigene na ili u tome). Nasuprot tome, skupina antitijela može se nazvati polivalentnom (ili nespecifičnom) ako ima afinitet za različite antigene ili mikroorganizme. Intravenozni imunoglobulin, ako nije drugačije naznačeno, sastoji se od polivalentnog IgG. Nasuprot tome, monoklonska antitijela su monovalentna za isti epitop.

Medicinske primjene:

Otkrivanje određenih antitijela vrlo je čest oblik medicinske dijagnostike, a aplikacije poput serologije ovise o tim metodama. Na primjer, u biokemijskim testovima za dijagnosticiranje bolesti, iz krvi se procjenjuje titar antitijela usmjerenih protiv Epstein-Barr virusa ili Lajmske bolesti. Ako ta protutijela nisu prisutna, ili osoba nije zaražena, ili se infekcija dogodila jako davno, a B stanice koje stvaraju ta specifična protutijela prirodno su propadale. U kliničkoj imunologiji razine pojedinih klasa imunoglobulina mjere se nefelometrijom (ili turbidimetrijom) kako bi se okarakterizirao profil antitijela pacijenta. Povišenja u različitim klasama imunoglobulina ponekad su korisna u određivanju uzroka oštećenja jetre u pacijenata kod kojih je dijagnoza nejasna.

Na primjer, povišeni IgA ukazuje na alkoholnu cirozu, povišeni IgM ukazuje na virusni hepatitis i primarnu bilijarnu cirozu, dok je IgG povišen kod virusnog hepatitisa, autoimunog hepatitisa i ciroze. Autoimuni poremećaji često se mogu pratiti antitijelima koja vežu vlastite epitope tijela, a mnogi se mogu otkriti krvnim pretragama. Protutijela usmjerena protiv površinskih antigena crvenih krvnih stanica u imunološki posredovanoj hemolitičkoj anemiji otkrivaju se Coombsovim testom. Coombsov test također se koristi za probir antitijela u pripravcima za transfuziju krvi, kao i za probir antitijela kod žena u trudnoći. Praktično, nekoliko imunodijagnostičkih metoda koje se temelje na otkrivanju složenih antigen-antitijela koristi se za dijagnosticiranje zaraznih bolesti, na primjer ELISA, imunofluorescencija, Western blot, imunodifuzija, imunoelektroforeza i magnetski imunološki test. Protutijela podignuta protiv humanog korionskog gonadotropina koriste se u testovima trudnoće bez recepta. Ciljana terapija monoklonskim antitijelima koristi se za liječenje bolesti poput reumatoidnog artritisa, multiple skleroze, psorijaze i mnogih oblika raka, uključujući ne-Hodgkinov limfom, kolorektalni karcinom, rak glave i vrata te rak dojke. Neki imunološki nedostaci, poput X-povezane agamaglobulinemije i hipogamaglobulinemije, rezultiraju djelomičnim ili potpunim nedostatkom antitijela. Ove se bolesti često liječe induciranjem kratkotrajnog oblika imuniteta koji se naziva pasivni imunitet. Pasivni imunitet postiže se prijenosom gotovih antitijela u obliku humanog ili životinjskog seruma, skupljenih imunoglobulina ili monoklonskih protutijela, u zahvaćenu osobu.

Rezus faktor, također poznat kao Rhesus D (RhD) antigen, antigen je koji se nalazi na pojedincima crvenih krvnih stanica koji su rezus-pozitivni (Rh+) imaju ovaj antigen na svojim crvenim krvnim zrncima i pojedinci koji su rezus-negativni (Rh –) nemoj. Tijekom normalnog poroda, traume pri porodu ili komplikacija tijekom trudnoće, krv iz fetusa može ući u majčin sustav. U slučaju Rh-inkompatibilne majke i djeteta, posljedično miješanje krvi može osjetiti Rh-majku na Rh antigen na krvnim stanicama Rh+ djeteta, stavljajući ostatak trudnoće i svaku sljedeću trudnoću u rizik za hemolitičku bolest novorođenčeta.

Rho (D) imuno globulinska antitijela su specifična za humani rezus D (RhD) antigen. Anti-RhD antitijela se primjenjuju kao dio prenatalnog režima liječenja kako bi se spriječila senzibilizacija koja se može pojaviti kada Rhesus-negativna majka ima Rhesus-pozitivan fetus. Liječenje majke s anti-RhD antitijelima prije i neposredno nakon traume i poroda uništava Rh antigen u majčinom sustavu iz fetusa. Važno je da se to događa prije nego što antigen može potaknuti majčinske B stanice da "zapamte" Rh antigen generiranjem memorijskih B stanica. Stoga njezin humoralni imunološki sustav neće stvarati anti-Rh antitijela i neće napadati rezus antigene sadašnje ili sljedeće djece. Liječenje imunološkim globulinom Rho (D) sprječava senzibilizaciju koja može dovesti do Rh bolesti, ali ne sprječava niti liječi samu temeljnu bolest.

Primjene istraživanja:

Specifična antitijela proizvode se ubrizgavanjem antigena u sisavca, poput miša, štakora, zeca, koze, ovce ili konja za velike količine antitijela. Krv izolirana od ovih životinja sadrži poliklonska protutijela i#8212 više antitijela koja se vežu za isti antigen — u serumu, koji se sada može nazvati antiserum. Antigeni se također ubrizgavaju u piliće za stvaranje poliklonskih antitijela u žumanjku.

Da bi se dobilo antitijelo koje je specifično za jedan epitop antigena, limfociti koji luče antitijela izoliraju se iz životinje i ovjekovječe spajanjem s staničnom linijom raka. Spojene stanice nazivaju se hibridomi i neprestano će rasti i lučiti antitijela u kulturi. Pojedinačne stanice hibridoma izoliraju se razrjeđivanjem kloniranjem kako bi nastali stanični klonovi koji svi proizvode ista antitijela. Ova protutijela nazivaju se monoklonska antitijela. Poliklonska i monoklonska protutijela često se pročišćavaju pomoću proteina A/G ili kromatografije sa afinitetom prema antigenu.

U istraživanju se pročišćena antitijela koriste u mnogim aplikacijama. Najčešće se koriste za identifikaciju i lociranje unutarstaničnih i izvanstaničnih proteina. Protutijela se koriste u protočnoj citometriji za razlikovanje tipova stanica po proteinima koje izražavaju različite vrste stanica izražavaju različite kombinacije nakupine molekula diferencijacije na svojoj površini i proizvode različite unutarstanične i izlučujuće proteine. Također se koriste u imunoprecipitaciji za odvajanje proteina i svega što je na njih vezano (koimunoprecipitacija) od drugih molekula u staničnom lizatu, u Western blot analizama za identifikaciju proteina odvojenih elektroforezom, te u imunohistokemiji ili imunofluorescenciji za ispitivanje ekspresije proteina u presjecima tkiva ili za lociranje proteina unutar stanica uz pomoć mikroskopa. Proteini se također mogu detektirati i kvantificirati s antitijelima, pomoću ELISA i ELISPOT tehnika.


Gledaj video: Anti D Prophylaxis - in Rh negative Pregnancy (Lipanj 2022).


Komentari:

  1. Breine

    does not agree at all

  2. Drygedene

    Prilično vrijedna poruka

  3. Jarrett

    Go see a good movie and take a break, I just wrote an article about where to get films. Look in the right menu section Pages, and there is an article called Where to get films? There are links to FTP servers, trackers.

  4. Tenris

    Da, potpuno

  5. Boghos

    Ovo pitanje mi nije jasno.

  6. Flynn

    I beg your pardon, that doesn't suit me at all.

  7. Florentino

    Što je smiješna fraza



Napišite poruku